تولید فلاژلین نوترکیب ویبریو کلرا و بررسی آنتی ژنیسیته آن

چکیده فارسی: مقدمه: ویبریو کلره عامل بیماری وبا در انسان می باشد. بیان فلاژله و تحرک آن، در کلونیزاسین و ویرولانس باکتری دخیل است. flaa یکی از پنج ژن کد کننده فلاژلین در این باکتری بوده که به عنوان فلاژلین اصلی در حرکت باکتری، سنتز و ایمنی زائی فلاژله مطرح می باشد. در این مطالعه بیان این پروتئین در باکتری اشرشیا کلی و تولید پروتئین نوترکیب مورد بررسی قرار می گیرد. هدف از این مطالعه تولید یک واکسن نوترکیب برای ویبریو کلره در آینده است. روش کار: ژن flaa با طراحی پرایمرهای اختصاصی وبا استفاده ازروش pcr ، تکثیر گردید. ژن flaa ابتدا در وکتور پلاسمید ptz57r/t و سپس در پلاسمید pgex4t-1 کلون و بیان گردید. پلاسمید حامل ژن flaa وارد اشریشیا کلی سویه bl21- de3 شد. تولید پروتئین با القا توسط iptg و بهینه سازی شرایط صورت گرفت. کیت g.s.t جهت خالص سازی پروتئین نوترکیب و تایید نهایی پروتئین نوترکیب با استفاده از آزمایش وسترن بلات انجام گرفت. میزان پروتئین ها با استفاده از روش براد فورد اندازه گیری شد. نتایج: نتایج این مطالعه بیان موفقیت آمیز پروتئین های نوترکیب را در دو سلول میزبان از سویه های اشرشیاکلی مانندe- coli bl21(dh3) plyss و e- coli bl21(dh3) ثابت کرد. ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط روش pcr با ژن flaa ویبریو کلره یکسان بود. تولید پروتئین نوترکیب flaa با القا پلاسمید flaa - pgex4t-1 توسطiptg انجام گردید. پروتئین های نوترکیب بوسیله کیت g.s.t تخلیص شدند . سرم موش واجد آنتی flaa در روش وسترن بلات با پروتئین تولید شده واکنش داد. الگوی واکنش این پروتئین ها با آنتی بادی های ضد آن ها ، نشان داد که این پروتئین ها خاصیت آنتی ژنیک دارند. بحث و نتیجه گیری: نتایج بدست آمده نشان داد که بیان پروتئین نو ترکیب flaa از میزبان اشریشیا کلی حامل این ژن امکان پذیر است و پروتئین های نوترکیب بدست آمده از فلاژلین ویبریو کلرا دارای خاصیت آنتیژنیسیته می باشد. پروتئین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ می کند بنابراین این پروتئین نوترکیب می تواند به عنوان یک کاندید مناسب برای طراحی واکسن علیه این بیماری مورد استفاده قرار گیرد.